HotStart Taq-DNA-Polymerase

Quelle: Ursprungsform ist die thermostabile DNA-Polymerase, die aus dem thermophilen Bakterium Thermus aquaticus isoliert wurde. Bei dem vorliegenden Enzym handelt es sich um eine modifizierte Variante, die rekombinant in E. coli exprimiert wurde. Die Hot-Start Taq-DNA-Polymerase wird durch Inkubation bei 95°C über einen Zeitraum von 15 Minuten aktiviert. Dadurch wird die unspezifische Bindung von Primern und die Bildung von Primer-Dimeren bei niedrigen Temperaturen zu Beginn der PCR verhindert.

Enzymaktivitäten: Die Hot-Start Taq-DNA-Polymerase ist eine hochprozessive 5’ -> 3’-DNA-Polymerase mit 5’ -> 3’-Exonukleaseaktivität. Eine 3’ -> 5’-Exonukleaseaktivität fehlt vollständig. Zusätzlich fügt das Enzym einzelne Nukleotide (fast ausschließlich Adenosin) an die 3´-Enden der DNAs an, so dass eine TA-Klonierung ohne weitere Modifizierungen möglich ist.

Anwendungs- & Qualitätskontrolle

Primer-Extensionsreaktionen: das Enzym ist frei von Nicking- und Primeraktivitäten, sowie von Exonukleasen und unspezifischen Endonukleasen.

SDS/PAGE: 95 kD- Bande, Reinheit >98%. Aktivität und Stabilität wurden mittels PCR getestet. Die Fehlerrate pro Nukleotid pro Zyklus liegt bei ~2,5 x 10 -5; die Genauigkeit bei ~ 4 x 10 4. Die Halbwertzeit beträgt 90 min bei 95ºC.