PCR-Mastermix


PCR Mastermix

Der PCR-Mastermix ist eine „Ready-to-use“-Lösung für die PCR. Er enthält alle benötigten Reagenzien, bis auf die Template-DNA, Primer und Wasser.

Zusammensetzung des 5x PCR-Mastermix:

  • Taq-DNA-Polymerase
  • 5x Reaktionspuffer B (400 mM Tris-HCl pH 9,4 – 9,5 bei 25 °C, 100 mM (NH4)2SO4, 0,1% w/v Tween-20)
  • 12,5 mM MgCl2, (= 2,5 mM in 1x Lösung)
  • 1 mM von jedem dATP, dGTP, dCCT und dTTP (= 200 µM je dNTP in 1x Lösung)

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Quelle: Ursprungsform ist die thermostabile DNA-Polymerase, die aus dem thermophilen Bakterium Thermus aquaticus isoliert wurde. Das vorliegende Enzym ist rekombinant in E. coli exprimiert.

 

Enzymaktivitäten: Die Taq-DNA-Polymerase ist eine hochprozessive 5’ -> 3’-DNA-Polymerase mit einer 5’ -> 3’-Exonukleaseaktivität. Eine 3’ -> 5’-Exonukleaseaktivität fehlt vollständig. Zusätzlich fügt das Enzym einzelne Nukleotide (fast ausschließlich Adenosin) an die 3´-Enden der DNAs an, so dass eine TA-Klonierung ohne weitere Modifizierungen möglich ist.

 

Anwendungs- & Qualitätskontrolle

Primer-Extensionsreaktionen: das Enzym ist frei von Nicking- und Primeraktivitäten, sowie von Exonukleasen und unspezifischen Endonukleasen. SDS/PAGE: 95 kD- Bande, Reinheit >98%. Aktivität und Stabilität wurden mittels PCR getestet. Die Fehlerrate pro Nukleotid pro Zyklus liegt bei ~8,3 x 10 -5; die Genauigkeit beträgt ~ 1,2 x 10 4. Die Halbwertzeit beträgt 90 min bei 95 ºC.


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Datenblatt
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